流式細胞術在2020年歐洲血液學年會(EHA)上大放異彩

發布時間:2020-06-15 18:15:02      來源:
北京2020年6月15日 /美通社/ -- 2020年新冠疫情全球肆虐,但疫情并未阻擋血液界學者對學術研究和交流分享的熱情。承載眾多看點的第25屆歐洲血液學協會(EHA)年會,在大家的期待中采用線上虛擬會議的模式如期舉行。

作為歐洲血液學領域規模最大的國際會議,EHA年會每年吸引來自全球100多個國家的上萬名專業人士與會,一起分享、探討有關血液學的創新理念及最新的科學和臨床研究成果,能夠登上EHA舞臺,表示在血液學領域具有較高的學術水平。此次,陸道培醫學團隊有3項研究成果亮相EHA大會,向世界展示和分享陸道培醫學團隊最新科研成果。

研究一:使用cCD79a設門的多色流式可以有效監測CD19-CAR-T治療B-ALL后MRD,并且預測橋接移植的預后

第一作者流式細胞室陳曼醫師的文章“Multicolor Flow Cytometry Panel with cCD79A Gating to Detect Minimal Residual Disease in Patients with B-Lymphoblastic Leukemia/Lymphoma Post Anti-CD19 CAR-T Therapy Bridging to Allo-HSCT”(胞漿CD79a抗體設門多色流式法監測CD19-CAR-T橋接異基因移植治療難治復發急性B淋巴細胞白血。ㄕ枺篠113)被選為口頭發言。

陸道培醫療集團在CD19嵌合抗原受體T(CD19-CAR-T)細胞治療急性B淋巴細胞白血。˙-ALL)中有豐富的經驗,尤其是橋接異基因造血干細胞移植,挽救了無數難治復發患者生命。這類疾病的病情監測、療效評價、預后評估中,流式細胞術(FCM)微小殘留病變(MRD)檢測技術起到不可或缺的作用。

但是常規的B-ALL的MRD多色流式檢測方法均使用CD19設B細胞門,而CD19-CAR-T治療后,由于13-60%的MRD陽性或者復發患者腫瘤細胞會或多或少丟失CD19,故不再適合使用傳統方案監測MRD。以王卉主任、陳曼醫師為代表的團隊,探討了陸道培醫療集團流式細胞室使用胞漿CD79a(cCD79a)抗體設門多色流式細胞術檢測MRD方法在CD19-CAR-T治療中的有效性,并研究其在輸注后橋接異基因移植(allo-HSCT)整個治療過程中的評價療效及監測預后的作用。

實驗中分別選取10例B-ALL完全緩解(CR)患者的骨髓標本及10例B-ALL MRD陽性的骨髓標本,同時使用新方案與經典方案進行檢測,采用線性回歸方法進行結果一致性分析,證實兩種方案的一致性好。

然后選取2016年6月~2017年5月于河北燕達陸道培醫院經CD19-CAR-T細胞輸注后橋接移植的59例患者,使用新方案進行骨髓MRD監測,中位隨訪24月。其中51例(86.44%)患者CD19-CAR-T后FCM-MRD陰性,8例(13.56%)患者CAR-T細胞輸注后MRD陽性或者復發。兩組病例均在中位時間1-2個月左右進行了異基因造血干細胞移植。

經單因素卡方檢驗分析,CD19-CAR-T后移植前以及移植后FCM-MRD均與移植預后有強相關性(分別為P<0.0001,P=0.000)。59例患者中,移植后復發總計9例,其中7例死亡,4例為移植前FCM-MRD陽性患者(占帶瘤移植組50%,4/8例),3例為FCM-MRD陰性移植患者(占MRD陰性移植組5.88%,3/51例),2例復發后緩解均為移植前FCM-MRD陰性患者。

流式細胞術在2020年歐洲血液學年會(EHA)上大放異彩   
  研究一在25th EHA口頭報告的幻燈片節選

結論認為,使用cCD79a設門的多色流式B-ALL檢測MRD方案,可以有效監測CD19-CAR-T后MRD,并且預測CD19 CAR-T后橋接移植的預后。

研究二:流式細胞術微球法檢測24種細胞因子在CAR-T治療中的應用

第一作者細胞凍存室王東出醫師的文章“EP403 Monitoring 24 Cytokines by Cytometric Bead Array during the Chimeric Antigen Receptor T Cells Treatment”(流式細胞術微球法檢測24種細胞因子在嵌合抗原受體T細胞治療中的應用)被選為墻報展示。

研究表明在CAR-T治療中,多種細胞因子在細胞因子釋放綜合征(CRS)或者細胞因子風暴中起到重要作用,因此細胞因子檢測是評價CAR-T副作用的重要指標。流式細胞微球陣列技術(CBA)是最近發展起來的一項新技術,與傳統的ELISA方法相比,具有靈活、快速、高性價比、節約標本等優點。以王卉主任、王東出醫師為代表細胞凍存室團隊設計了一項新的24種細胞因子組合方案,使用CBA方法評價了其在CAR-T患者的腦脊液和外周血細胞因子檢測中的作用。

他們首先進行了方法學對照性研究,收集了29例健康志愿者的外周血,25例回輸CD19-CAR-T細胞后的ALL患者外周血標本,分別使用ELISA(Quantikine,RND)檢測四種常見細胞因子(IL-6、IL-10、IFN-γ、可溶性CD25(sCD25)),與CBA(北京曠博公司)方法進行了比較。結果表明,每種技術均有很好的重復性,兩者相關性很好。

為了研究CAR-T后細胞因子變化曲線,研究者選取的25例CAR-T治療患者每人至少采集了5個時間點。由于標本量的問題,ELISA方法只做了正常對照和患者的外周血標本,CBA方法除了檢測外周血標本,還對41例未做CAR-T的完全緩解患者腦脊液標本和15例CART治療后腦脊液標本進行了檢測。

結果表明,在健康對照和患者外周血標本組,雖然IL-6和sCD25檢測的絕對值兩種技術有差異,但是兩種方法均可滿意顯示CAR-T治療后細胞因子變化曲線,一致性很高。尤為重要的是,CBA技術檢測腦脊液和外周血均有臨床實用性強的特點。CBA方法可以一次完成24種細胞因子的檢測,因此節約標本,讓腦脊液這種微量標本檢測成為可能;各種標本的檢測中都解決了ELISA方法必須批量檢測,隨意性差的特點,相比之下檢測時間短、性價比高,不論大批量還是急診隨機性標本都適合。

2020年2月起,陸道培醫療集團已經將CBA方法24種細胞因子檢測技術全面推向臨床,這項技術不僅可用于CAR-T治療患者的監測,同時在各種良、惡性疾病的診斷、治療,感染的免疫指標評價,移植物抗宿主病、CMV、EBV或者其他感染等移植后并發癥的診斷、評價,噬血綜合征等特殊免疫狀態的監測與防治中,都起到極為重要的作用。

研究三:CD69在AML微小殘留病變檢測中的意義

第一作者流式細胞室宮美維醫師的文章“The Clinical Significance of CD69 Detection in Minimal Residual Disease of Patiens with Acute Myeloid Leukemia”(CD69在急性髓系白血病微小殘留病變檢測中的意義)被選為大會論文集。

微小殘留病變(MRD)是惡性血液病重要的疾病監控、判斷預后、指導治療的指標,目前臨床常用的靈敏度較高的檢測方法包括實時定量聚合酶鏈反應(RQ-PCR)、多色流式(MFC)等。MFC通過分析細胞抗原表達情況區分正常細胞與異常細胞,具有快速、性價比高、覆蓋范圍廣、靈敏度高、特異性高的特點。目前流式細胞術對急性髓系白血。ˋML)檢測敏感性為10-3~10-4,雖然文獻報道覆蓋率為80-95%,但是臨床工作中低比例(低于0.1%)MRD檢測、以及缺乏特異性標志的標本檢測仍舊遇到瓶頸。以王卉主任、宮美維醫師為代表的流式細胞室團隊進行了一項研究,探討CD69在急性髓系白血。ˋML)微小殘留病變(MRD)檢測中的臨床意義。

方法:采用多參數流式細胞術檢測40例AML(包括初治AML及治療后MRD)患者骨髓中CD69的表達率及表達強度,另選取10例MRD陰性的AML患者作為對照組。對照組患者經細胞形態學、流式細胞術、分子及遺傳學檢查證實其骨髓完全緩解狀態。CD69表達強度計算,采用每個患者同一管標本中CD69陰性的淋巴細胞作為校準參照,分別計算對照組正常髓系原始細胞和實驗組惡性髓系幼稚細胞CD69中位熒光強度(MFI)與其CD69陰性淋巴細胞CD69MFI比值(MFIR)。

結果:CD69在正常髓系原始細胞中不表達。在40例AML患者中,有17例(42.5%)CD69表達陽性或部分陽性。陽性病例腫瘤細胞MFIR為15.13+9.58,與對照組比較,具有顯著性差異(P<0.01)。CD34+CD117+、CD34-/CD117+組為正常髓系原始細胞組,CD69陽性組和CD69陰性組為AML腫瘤細胞組。CD69陽性組MFIR高于CD69陰性組和正常對照組(P<0.01),后兩者無顯著性差異。

結論:CD69可以作為一個新的AML特異性抗原加入MRD檢測方案中,并有望成為嵌合抗原受體修飾的T細胞(CAR-T)治療AML的一個新靶點。

流式細胞術在2020年歐洲血液學年會(EHA)上大放異彩   
  上為研究二在25th EHA展示的墻報,下為研究三在25th EHA展示的論文摘要

三篇文章的通訊作者均為陸道培醫療集團檢驗科副主任、流式細胞室主任、信納克實驗室(CAP認證實驗室)主任王卉教授。

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  通訊作者及第一作者簡介

陸道培醫療集團檢驗科副主任、流式細胞室主任、信納克實驗室主任(副院長級)。中國中西醫結合學會檢驗專委會流式專委會主任委員;北京醫學檢驗學會血液和體液檢驗分會副會長;中國非公立醫療機構協會血液委員會常委;中國臨床流式聯盟常委;中國抗癌協會淋巴瘤學組、中國血液免疫學會流式學組、中國生物工程學會細胞分析專委會、北京細胞生物學會等諸多學會常委、委員和特聘專家。從事流式臨床診斷19年,獨立簽發30余萬份報告;全國28個。òㄅ_灣)講座600多場,為全國26個。òㄅ_灣)百家三甲醫院培訓了進修醫。

科研創新,競勝之道。陸道培醫療集團作為目前國內最大的造血干細胞移植中心,擁有專業的病理和檢驗醫學團隊,各實驗室之間緊密協作,及時為臨床一線醫生提供精準的檢驗報告,為患者的正確診斷和治療爭取寶貴的時間,其檢驗報告的準確性和易讀性得到業內的廣泛認可。

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